【操作步骤】:
(一)谷物(样品稀释10倍)
1、脂肪含量少的谷物样品(如大米、玉米、小米等)称取1g(精细粉碎),加入4ml 50%甲醇/水溶液;
2、充分振荡3min;
3、5000g离心,10min;
4、取400ul上清液,加600ul样品稀释液,充分混匀;
5、取50ul溶液用于检测。
(二)花生(样品稀释10倍)
1、称取1g样品(精细粉碎),加入2ml石油醚,再加入4ml 50%甲醇/水溶液;
2、充分振荡3min;
3、5000g离心,10min;
4、取400ul下层清液,加600ul样品稀释液充分混匀
5、取50ul溶液用于检测。
(三)食用油(样品稀释10倍)
1、称取1g样品,加入4ml石油醚,充分振荡;
2、再加4ml 50%甲醇/水溶液,轻摇3min,静置分层;
3、取400ul下层清液,加600ul样品稀释液充分混匀;
4、取50ul溶液用于检测。
(四)饲料(样品稀释5倍)
1、称取1g饲料样品(精细粉碎),加入4ml 50%甲醇/水溶液;
2、充分振荡3min;
3、5000g离心,10min;
4、取上层清液2ml并加入2ml三氯甲烷,轻摇3 min,静置分层;
5、取1ml下层液(三氯甲烷层),60℃氮气吹干;
6、加入500ul 50%甲醇/水(1:1)溶液溶解,并加入750ul样品稀释液,充分混匀;
7、取50ul溶液用于检测。
(五)面粉(样品稀释10倍)
1、称取1g面粉样品,加入4ml 50%甲醇/水溶液;
2、充分振荡3min;
3、5000g离心,10min;
4、取上层清液500ul并加入1ml三氯甲烷,轻摇3 min,静置分层;
5、取500ul下层液(三氯甲烷层),60℃氮气吹干;
6、加入250ul 50%甲醇/水溶液溶解,并加入375ul样品稀释液,充分混匀;
7、取50ul溶液用于检测。
(六)葡萄酒(样品稀释5倍)
1、取1ml葡萄酒样品,加入4ml三氯甲烷;
2、轻摇3 min,静置分层;
3、取1ml下层液(三氯甲烷层),60℃氮气吹干;
4、加入500ul 50%甲醇/水溶液溶解,再加入750ul样品稀释液,充分混匀;
5、取50ul溶液用于检测。
(七)啤酒(样品稀释10倍)
1、取1ml啤酒样品(去除CO2),加入2.5ml甲醇,再加入1.5ml蒸馏水;
2、振荡3min;
3、取出500ul振荡后的溶液再加入750 ul样品稀释液,充分混匀;
4、取50ul溶液用于检测。
(八)酱油、醋(样品稀释5倍)
1、称取1g样品,加入1ml蒸馏水和4ml三氯甲烷;
2、轻摇3min,静置(若未分层,5000g离心10min);
3、去1ml下层液(三氯甲烷层),60℃氮气吹干;
4、加入500ul 50%甲醇/水溶液溶解,并加入750ul样品稀释液,充分混匀;
5、取50ul溶液用于检测。
【注意事项】:
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20~25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M盐酸,避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒;也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂,掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存黄曲霉毒素总量ELISA检测试剂盒于2~8℃,不要冷冻,将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的显色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
显色试剂有任何颜色表明显色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(OD450nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
8、该黄曲霉毒素总量ELISA检测试剂盒理想中反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。